Interação entre neutrófilos humanos e macrófagos contribui no desfecho da infecção por Leishmania amazonensis / Interaction between human neutrophils and macrophages contributes to the outcome of infection by Leishmania amazonensis

Os neutrófilos são células que atuam na primeira linha de defesa do organismo contra patógenos e estão constitutivamente programadas para a morte celular por apoptose, sendo então, fagocitados por macrófagos. No presente estudo, avaliamos inicialmente o efeito da fagocitose de neutrófilos humanos em repouso: viáveis, apoptóticos ou necróticos, por macrófagos humanos infectados por Leishmania amazonensis. A interação com neutrófilos em repouso apoptóticos, mas não com células viáveis, leva a um aumento na taxa de infecção e carga parasitária em macrófagos. O favorecimento do crescimento intracelular do parasita em presença de neutrófilos apoptóticos foi dependente da produção de TGF-f3 e PG~. Por outro lado, houve uma diminuição da infecção dos macrófagos por L. amazonensis, assim como da carga parasitária, na presença de neutrófilos necróticos. A atividade leishmanicida nessas co-culturas foi dependente da produção de TNF-a, elastase neutrofilica (NE) e superóxido. A presença de neutrófilos ativados viáveis e apoptóticos pelo contato com fibronectina, mas não com outras proteínas de matriz extracelular, também reduz a taxa de infecção e a carga parasitária dos macrófagos infectados com L. amazonensis. O efeito microbicida nas co-culturas com neutrófilos ativados foi independente de contato e envolve a participação de enzimas neutrofilicas NE e MPO, bem como outros mediadores pró-inflamatórios como TNF-a, LTB4 e ROI. Os resultados apresentados neste estudo demonstram que a interação com neutrófilos humanos em repouso ou ativados é capaz de modular a resposta de macrófagos contribuindo para o desfecho da infecção por L. amazonensis.

Freeze-drying as an alternative method of human sclera preservation / Liofilização como alternativa à preservação de esclera humana

PURPOSE: To compare the effect of preserving sclera samples in either 95 percent ethanol or freeze-dried. METHODS: Ninety-six samples of human sclera were studied. Half of them were freeze-dried and half preserved in 95 percent ethanol. Preservation periods of 18, 45, 90 or 174 days were studied. Automated immunostaining was carried out in the Ventana BenchMarkR LT platform using collagen 1 and fibronectin antibodies. Histological staining was also performed with hematoxilin-eosin and Masson trichrome. Samples were classified according to the degree of collagen fiber parallelism (0-2), intensity of Masson staining (0-2), and the expression of both antibodies (0-3). Friedman and Wilcoxon tests were applied to compare preservation methods and p-values below 0.05 were considered to ensure statistical significance. RESULTS: Relevant results were found in three situations: (i) Friedman's test showed better collagen fiber integrity in the freeze-dried group rehydrated after 174-days as compared to the 90-day group; (ii) Wilcoxon's test showed better collagen fiber integrity in the freeze-dried group after 18 and 174 days as compared to the ethanol group; (iii) the freeze-dried group disclosed higher immunohistochemical expression for COL-1 antibody in the sclera samples rehydrated after 45, 90 and 174 days as compared to the ones rehydrated after 18 days. CONCLUSION: Histological and immunohistochemical analysis showed freeze-drying to be a superior method for sclera preservation as compared to 95 percent ethanol. This technique provides an easy method to manipulate tissue, with longer shelf life, and storage at room temperature.

OBJETIVO: Comparar dois métodos de preservação de esclera humana, liofilização e álcool 95 por cento, em diferentes períodos de tempo. MÉTODOS: Foram avaliados 96 fragmentos de seis escleras humanas. Metade das amostras foi submetida ao processo de liofilização e metade conservada em álcool 95 por cento. Dois fragmentos de cada grupo foram avaliados pelas colorações de hematoxilina-eosina e tricrômio de Masson e submetidos a técnica de imuno-histoquímica para os anticorpos fibronectina e colágeno 1, após 18, 45, 90 e 174 dias de preservação. Os espécimens foram classificados de acordo com o paralelismo (PF:0-2) e integridade (IF:0-1) das fibras de colágeno e expressão imuno-histoquímica para os anticorpos fibronectina (FIB:0-3) e colágeno 1 (COL-1:0-3). A análise estatística foi realizada por meio dos testes de Friedman e Wilcoxon e o valor de p menor que 0,05 foi considerado estatisticamente significante. RESULTADOS: Verificaram-se diferenças significantes em três situações: (i) maior integridade das fibras de colágeno das escleras liofilizadas após 174 dias quando comparado aos 90 dias; (ii) maior expressão imuno-histoquímica para o anticorpo COL-1 nas amostras de escleras liofilizadas após os 18 dias iniciais de preservação; (iii) maior integridade das fibras de colágeno das escleras liofilizadas após 18 e 174 dias quando comparado às escleras preservadas em álcool. CONCLUSÕES: A preservação de tecido escleral por liofilização mostrou-se técnica tão eficaz quanto a preservação em álcool, apresentado vantagem quando considerada a integridade das fibras de colágeno. A liofilização mostra-se benéfica por permitir a estocagem do tecido em temperatura ambiente e com prazo de validade estendido.

Modulation of fibronectin expression in the central nervous system of Lewis rats with experimental autoimmune encephalomyelitis

Fibronectin (FN), a large family of plasma and extracellular matrix (ECM) glycoproteins, plays an important role in leukocyte migration. In normal central nervous system (CNS), a fine and delicate mesh of FN is virtually restricted to the basal membrane of cerebral blood vessels and to the glial limitans externa. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE), an inflammatory CNS demyelinating disease, was induced in Lewis rats with a spinal cord homogenate. During the preclinical phase and the onset of the disease, marked immunolabelling was observed on the endothelial luminal surface and basal lamina of spinal cord and brainstem microvasculature. In the paralytic phase, a discrete labelling was evident in blood vessels of spinal cord and brainstem associated or not with an inflammatory infiltrate. Conversely, intense immunolabelling was present in cerebral and cerebellar blood vessels, which were still free from inflammatory cuffs. Shortly after clinical recovery minimal labelling was observed in a few blood vessels. Brainstem and spinal cord returned to normal, but numerous inflammatory foci and demyelination were still evident near the ventricle walls, in the cerebral cortex and in the cerebellum. Intense expression of FN in brain vessels ascending from the spinal cord towards the encephalon preceded the appearance of inflammatory cells but faded away after the establishment of the inflammatory cuff. These results indicate an important role for FN in the pathogenesis of CNS inflammatory demyelinating events occurring during EAE

Imunidade do feto e do recem-nascido / Immunity of the fetus and the newborn infant

O conhecimento da imunidade do feto e do recem-nascido e de grande importancia, por estar diretamente relacionado com a susceptibilidade deste, frente a processos infecciosos. Apresentamos uma revisao da literatura focalizando a imunidade humoral, celular, o sistema complemento e a atividade das celulas fagocitarias, chamando atencao para os aspectos mais importantes que poderao ser uteis na escolha de uma terapeutica imunologica adequada

Fetal fibronectin membrane immunoassay in the detection of premature rupture of membranes and prediction of preterm labour

The objective of this study was to evaluate the sensitivity of fetal fibronectin membrane immunoassay in the detection of premature rupture of membranes and prediction of preterm labour. Seventy-two woman were evaluated using ROM-Check immunoassay, which utilizes a monoclonal antibody to the fetal fibronectin in the amniotic fluid drained into the vagina of 13 patients with unequivocal preterm premature rupture of membranes and in 35 patients with a previous history or features of preterm labour. Sensitivity of the fetal fibronectin immunoassay was 90.5% and the specificity was 61.0% in the detection of preterm spontaneous rupture of membranes. The positive and negative predictive values were 54.3 and 92.6%, respectively. In the patients with a previous history of preterm labour, 92% of those with positive fibronectin immunoassay had preterm delivery within 7 days of sampling; this contrasts with 87% of those with negative fibronectin immunoassay who delivered at term, defined as >/= 37 weeks of gestation, or close to term, with much better perinatal outcome [p <0.01]. In conclusion, fetal fibronectin immunoassay is a good method of detecting ruptured membranes and a strong predictor of spontaneous preterm labour